Cumhuriyet Medical Journal

Abstract

SUMMARY

Objective: The dental pulp is the part in the center of a tooth made up of living connective tissue and cells called odontoblasts. The vitality of the dentin structure, both during health and after injury, depends on pulp cell activity and the signaling processes that regulate the cell’s behavior. Dental pulp tissue has condensed stem cell activity. Dental pulp stem cells are multipotent stem cells that have the potential to differentiate into a variety of cell types. Several publications have stressed the importance of the expression of pluripotentiality associated markers: the transcription factors Nanog, Sox2, Oct3/4, SSEA4, CD13, Stro1 are indispensable for the stem cells to divide indefinitely without affecting their differentiation potential (self renewal) capacity. Progesterone is a steroid hormone leading to menstrual cycle and gestation. There is a widespread rumor among people that pregnancy causes toothy loss.

Method: So, progesterone was applied in different concentrations on human dental pulp cells in cell culture. Cell viability assay was applied 24^th hour later with trypan blue. RNA isolation, cDNA synthesis and Real Time PCR analysis were applied on selected transcription factors (Nanog and Oct4 (POU5F1) genes) which have role on steamness of stem cells.  Gene expression analyses results were correlated with the cell viability assay results.

Results: Cell viability assay results were 80% viable in control, 82% viable in 7 ml progesterone application, 81% viable in 14 ml progesterone application, 83% viable in 21 ml progesterone application. Due to our findings, progesterone in different concentrations did not chance the cell viability in dental pulpa cells. On gene expression analyses, preliminary results supported that high concentrations of progesterone enhance the gene expressions of steamness genes (Nanog, and Oct4) in dental pulp cells.

Conclusions: So, progesterone did not change cell viability in high concentrations. We assume that progesterone did not affect apopitotic pathways on dental pulp cells. On the other hand, high gene expressions of Nanog, and Oct4 in high doses of progesterone represent the importance of progesterone hormone in dental pulp cells including stem cells maintenance.

Key words: Dental pulp tissue, Stemness , Nanog, Oct4(POU5F1).

ÖZET

Amaç: Diş pulpa dişin merkezinde olan konnektif doku ve odontoblast hücrelerden oluşan yapıdır. Diş sağlam veya yaralanmışken dentin yapısının canlılığına hücre sinyal aktivitelerine bağlıdır. Bu yapı yoğun kök hücre aktivitesine sahiptir.  Diş pulpa kök hücreleri multipotent yapıdadır ve birçok hücreye farklanır. Birçok yayın kök hücrelerin farklanmadan bölünme (self renewal) kapasitesi ile ilgili Nanog, Sox2, Oct¾, SSEA4, CD13, Stro1 gibi transkripsiyonel faktörlerinin önemini ortaya koymaktadır. Progesteron adet döngüsü ve hamilelikte önemli bir hormondur. Halk arasında hamileliklerin diş kaybına neden olduğu yönünde yaygın bir inanış vardır.

Yöntem: Progesterone hücre kültüründeki diş pulpa hücrelerine uygulandı. “Trypan blue” ile 24 saat sonrası hücre yaşaması ile ilgili deney yapıldı. RNA izolasyonu, c-DNA sentezi ve Real Time PCR analizi ile kök hücrelerin köklülük özelliklerini gösteren transkripsiyon faktörleri [Nanog, ve Oct¾ (POU5F1) genleri] çalışıldı. Gen ekspresyon analizi sonuçları hücre yaşaması ile ilgili deney sonuçları ile karşılaştırıldı.

Bulgular: Hücre canlılık oranını gösteren tripan blue testinde; kontrol hücrelerinde %80, 7 µl Progesteron uygulanan grupta %82, 14 µl Progesteron uygulanan grupta %81 ve 21 µl Progesteron eklenen grupta ise %83 oranında canlı hücre saptandı. Bu sonuçlara göre, farklı konsantrasyonlarda progesteron diş pulpa hücrelerinin canlılık oranlarını değiştirmemektedir. Gen ekspresyon analizlerinde ilk sonuçlar yüksek doz progesteronun diş dokusunda köklülük ile ilgili genlerin (Nanog ve Oct¾) gen ekspresyonlarını arttırdığı, dental pulpa hücrelerini etkilediklerini ortaya koydu.

Sonuç: Bu sonuçlara göre Progesteron yüksek konsantrasyonlarda hücre canlılık oranını değiştirmemektedir. Biz progesteronun diş pulpa hücrelerinde apopitotik yolakları etkilemediğini düşünüyoruz. Diğer taraftan Nanog ve Oct4 gen ekspresyonunun yüksek Progesteron konsantrasyonlarında artmış olması kök hücreleri de içeren dental pulpa hücrelerinin devamlılığında progesteron varlığının önemini ortaya koymaktadır. 

Anahtar sözcükler: Diş pulpa dokusu, Köklülük, Nanog, Oct¾ (POU5F1).